用酵母双杂交筛选与小麦黄花叶病毒CP互作的寄主因子

为筛选与小麦黄花叶病毒外壳蛋白（wheat yellow mosaic virus coat protein， WYMV-CP）互作的小麦蛋白，构建了小麦茎叶酵母双杂交cDNA文库，并从中筛选获得了与WYMV-CP互作的小麦蛋白基因片段。从小麦茎叶中提取小麦总RNA,分离mRNA后，利用GATE-WAY技术将反转录得到的小麦cDNA片段定向转移到目的载体，同源重组反应后成功构建小麦cDNA文库。经检测，小麦cDNA文库的滴度为5.86×106 CFU·mL-1,库容量为2.34×107 CFU,重组率为95.8%。根据NCBI上WYMV-CP开放阅读框信息，构建了诱饵载体pGBK-CP，通过酵母双杂交筛选获得了若干阳性克隆，共转化试验初步验证了WYMV-CP与PEPCK、PAL等蛋白的互作关系。本研究利用酵母双杂交技术成功获得与WYMV-CP互作的小麦蛋白基因片段，为明确WYMV的致病机制提供了科学的依据。