‘云香’水仙NtWRKYY1基因的分离与功能分析

为明确WRKY转录因子在‘云香’水仙中的功能，该研究以‘云香’水仙为材料，克隆了WRKY基因，命名为NtWRKYY1（GenBank登录号为KX056495）。序列分析显示，NtWRKYY1基因开放阅读框（ORF）长度为510 bp，编码169个氨基酸。多序列比对和系统进化树分析显示，NtWRKYY1编码蛋白含1个WRKY结构域和C2H2锌指结构（Cx4Cx23HxH），与AtWRKY57聚在一起，属于第Ⅱc类WRKY转录因子。组织表达和时空表达分析显示，NtWRKYY1基因在花中表达量高于根和叶，且在花瓣及副冠中的表达量随开花过程（花蕾期、始花期、盛花期、衰败期）呈上升趋势。植物激素和非生物胁迫分析显示，NtWRKYY1基因受脱落酸（ABA）、高温、干旱和盐诱导，受茉莉酸甲酯（JA）抑制，表明NtWRKYY1基因可能在‘云香’水仙花朵的衰老过程中起正调节作用，同时参与‘云香’水仙ABA、JA等激素信号转导及高温、干旱、盐碱等非生物胁迫过程的调控。利用In Fusion克隆技术成功构建过表达载体pMDC140 NtWRKYY1，并采用农杆菌介导叶盘法转化烟草。RT PCR和GUS染色结果显示，目的基因已成功导入烟草基因组中。