石榴4 香豆酸辅酶A连接酶基因的克隆和表达分析

4 香豆酸辅酶A连接酶（4 coumarate CoA ligase，4CL）是木质素合成途径的关键酶。该研究以‘红玉石籽’ (Punica granatum cv. Hongyushizi)石榴为试验材料，采用RACE和RT PCR方法获得4CL同源基因Pg4CL。Pg4CL基因cDNA全长2 121 bp，编码544个氨基酸；序列比对和功能域分析发现，Pg4CL包含有2个保守域SSGTTGLPKGV和GEICIRG；系统进化树分析显示，Pg4CL与其他物种起源相同，而与赤桉 Ec4CL亲缘关系最近。荧光定量PCR分析表明，Pg4CL基因在叶、果皮、种皮和茎等组织中均有表达，其中果皮和叶片中表达量较高，种皮中表达量最低；Pg4CL基因在6个石榴品种的种皮中均有表达，其中在‘突尼斯软籽’中表达较高，‘会理软籽’表达量最低；Pg4CL 基因在‘红玉石籽’籽粒的不同时期均有表达，在15~60 d相对表达量逐步上升，并在 60 d时达到最高；75 d以后表达量急剧下降，仅维持较低水平表达。