‘云香水仙NtWRKYY2基因的克隆及功能分析

以‘云香’水仙为材料，采用PCR技术分离中国水仙WRKY转录因子家族成员NtWRKYY2（GenBank登录号为KX056496），其开放阅读框（ORF）长度为867 bp，编码289个氨基酸。氨基酸序列比对及系统进化树分析显示，NtWRKYY2编码蛋白含1个WRKY结构域和C2H2锌指结构（Csx4Cx23HxH），属于第Ⅱd类WRKY转录因子。实时荧光定量PCR（qRT PCR）分析显示，NtWRKYY2在‘云香’水仙应对盐胁迫中显著上调表达。利用In Fusion克隆技术成功构建过表达载体pMDC140 NtWRKYY2，并采用农杆菌介导叶盘法转化烟草，获得11株卡那霉素抗性植株，转化子进一步PCR检测结果显示，其中有8株目的基因已成功导入烟草基因组中，转化率为72%。盐胁迫处理和叶绿素荧光参数分析显示，盐胁迫处理后NtWRKYY2过表达的转基因烟草萎蔫和黄化程度小于野生型植株，Fv/Fm值下降幅度小于野生型植株。研究表明，NtWRKYY2过表达的转基因烟草具有抵抗盐胁迫的能力。该研究为水仙抗盐转基因育种提供备选目的基因。