黄瓜CsERECTA基因的原核表达及其多克隆抗体制备

ERECTA基因编码一个富含亮氨酸重复序列结构的丝/苏氨酸类受体蛋白激酶，参与调控植物器官的形态建成，在株型控制及抗逆方面也有重要作用。该研究通过构建带有maltose binding protein（MBP）标签的pET21a CsERECTA融合蛋白原核表达载体，实现了在大肠杆菌(E. coli )BL21(DE3)中的高效表达，并对诱导表达的温度、时间和IPTG浓度进行了优化。利用镍离子螯合层析纯化得到MBP CsERECTA融合蛋白，再用rTEV蛋白酶对其进行酶切，得到CsERECTA蛋白并制备了该蛋白的多克隆抗体。结果表明，黄瓜CsERECTA蛋白以可溶和包涵体 2 种形式表达，低温有助于蛋白以可溶性形式大量存在。最佳诱导温度为23 ℃，诱导时间为6 h，IPTG浓度为0.5 mmol·L-1。通过Western blot可检测到黄瓜内源的CsERECTA蛋白，说明制备的多可隆抗体具有较好的特异性。多克隆抗体的成功制备为进一步研究CsERECTA的功能奠定了基础。