fpv4b核心蛋白基因的克隆及其探针制备

？利用pcr方法成功克隆了fpv4b核心蛋白基因1361bp片段。序列分析表明:该序列与模板dna(af198100)的碱基序列同源性为99.5%,只有7个碱基差异(第215位c→a,第386位t→a,第388位g→a,第1014位t→g,第1034位t→g,第1137位c→t,第1143位a→g)。回收fpv4b核心蛋白基因1361bp片段与pmd18-t载体相连构建重组质粒pmd18-t-4b,用ecorⅰ酶切pmd18-t-4b后得到1个约360bp大小的dna片段,以其为模板制备了地高辛标记的dna探针。对新标记的探针进行标记效率检测,结果显示其标记效率为100mg/l。敏感性检测表明,该探针对同源dna的检出限量为10pg。特异性检测结果表明,用本试验所标记的探针对提取的fpv282e4和fpvjl株dna、重组质粒pmd18-t-4b进行检测结果均呈阳性,而鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、cef的核酸提取物均呈阴性,说明该探针具有较强的特异性。