鹅细小病毒四平分离株vp3基因的克隆与序列分析

？根据已发表的鹅细小病毒(gpv)核苷酸序列,设计并合成了1对引物,对吉林农业大学预防兽医学研究室分离鉴定的gpv四平株(sp)主要保护性抗原蛋白vp3基因进行扩增。所得到的pcr产物片段大小约1.6kb,与预期片段大小相符。将该片段纯化后与t载体连接,转化到感受态大肠杆菌jm-109中进行克隆。对所提质粒进行快速鉴定、pcr鉴定以及限制性内切酶nheⅰ和bamhⅰ双酶切鉴定,筛选阳性重组质粒,对重组质粒测序并进行核苷酸序列分析。结果表明:gpv四平株vp3基因长1605nt,包含了完整编码gpvvp3蛋白阅读框,且与国内gpv分离株b,gd,hg5/82相应核苷酸序列和氨基酸序列的同源性较高,分别为96.2%,96.3%,96.4%和97.4%,98.7%,98.9%。据此认为,gpv四平株vp3基因可以作为构建具有普遍应用价值的基因工程疫苗的候选基因。