猪瘟病毒2.1b基因亚亚型野毒株的体外细胞传代适应与全基因组序列分析

？利用rt-pcr从广东某猪场疑似猪瘟（classicalswinefever,csf）病例中检测出csfv，并对扩增的e2全长基因进行了序列测定和系统进化分析。结果表明：引发该起猪瘟疫情的毒株属于csfv21b基因亚亚型，命名为gd176。为了进一步了解该毒株的复制特点，利用pk-15细胞对gd176进行了体外细胞适应性传代，并对获得的细胞适应毒gd176f46进行了全基因组测序。结果表明:gd176通过在pk-15上不断传代，最终获得了高滴度的适应毒株，其滴度从第6代的102.61tcid50/ml提高至第46代的108.06tcid50/ml。病毒生长动力学结果显示,gd176f46在感染后72h病毒滴度达到最高值（108.17tcid50/ml）。为进一步分析gd176在细胞传代适应过程中的稳定性，对不同代次细胞毒的e2全长基因进行扩增和序列测定，结果发现:gd176f0与gd176f6、f10、f15、f20、f25、f30、f35、f40和f46的e2基因序列完全一致，这表明囊膜蛋白e2在病毒适应pk-15细胞过程中非常稳定。通过比对gd176和其他2.1亚型毒株各蛋白的氨基酸序列发现，不同毒株之间同源性最小的病毒蛋白是ns5a，低于病毒囊膜糖蛋白e2。获得了高度适应pk-15细胞的gd176细胞毒，为进行病毒毒力评价、复制和致病特性研究奠定了基础。