一株大肠埃希菌烈性噬菌体φtri-1的分离及特性分析

？通过在e.coli菌液中加入土壤悬浮液共培养获得噬菌体，利用双层平板法反复纯化4次后得到单一清晰的噬菌斑。将单个噬菌斑加入对数早期的e.coli菌液中增殖培养后利用核酸抽提试剂盒提取总核酸，并分别用dnaseⅰ和rnasea对总核酸进行消化，利用限制性内切酶hindⅲ和ecorⅰ对其进行酶切；增殖后的噬菌体液进行噬菌体颗粒浓缩，取浓缩液负染后置于电子显微镜下确定噬菌体的形态特征，并进行sds-page电泳分析，确定其蛋白条带；同时测定其他生物学特性，包括滴度、最佳感染复数、一步生长曲线以及其对温度、ph、紫外线、氯仿的敏感性等。结果表明：分离并纯化出1株e.coli烈性噬菌体，命名为φtri-1，形态特征：头部为二十面体的立体对称，直径约为60nm，有一长尾，长约200nm；其核酸属于双链dna，按照国际病毒分类委员会分类标准，其属于有尾噬菌体目（caudovirales），长尾噬菌体科（siphoviridae）的烈性噬菌体。生物学特性测定结果显示φtri-1对e.coli的最佳感染复数为0.1，潜伏期约为20min，爆发期约为60？？min，裂解量约为38；φtri-1在40℃时活性最高，在20~70℃活性均较强，80℃时活性丧失；其酸碱耐受力较强，在偏碱环境下活性相对更高；对紫外线有一定的耐受能力；对氯仿敏感，浓度5%的氯仿即可致其失活。分离到的噬菌体属于有尾噬菌体目，长尾噬菌体科，综合其各项生物学特性可知其潜伏期短，裂解能力强，环境适应能力强，具有很好的杀菌效果，具有开发为抗e.coli菌剂的潜力。