狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中稳定表达条件的优化及纯化

？将狂犬病病毒srv9株核蛋白基因按正确的读码框克隆至gst融合表达载体pgex-4t-1中,转化至大肠杆菌rosetta株,iptg诱导表达。表达的融合蛋白经sds-page分析显示,相对分子量约为82kd,与预期大小一致。western-blot检测结果表明,融合蛋白能与多克隆阳性血清发生特异性反应。为获取大量elisa包被用核蛋白,试验还借助sds-page方法对重组目的基因的表达条件进行了优化,比较了诱导温度、菌密度、iptg浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响,以确定最佳诱导表达条件。结果表明:27~32℃,od5500.3~0.4,iptg0.06mmol/l、诱导至od550值不再增加时为最佳诱导表达条件。优化后经扫描分析显示,所表达融合蛋白占菌体总蛋白的20%以上。经包涵体纯化和亲和层析纯化,可获得纯度较高的gst融合蛋白。