犬冠状病毒部分纤突蛋白基因的分子克隆

？以rt-pcr方法扩增出犬冠状病毒(ccv)ys1、ci12株国内分离病毒的部分纤突蛋白基因,经酶切鉴定为ccv特异性核苷酸片段。采用平端连接法将wizardtmpcr纯化试剂盒纯化的pcr产物克隆于puc19smaⅰ酶切位点上,获得ys1puc19、ci1puc19重组质粒。琼脂糖凝胶电泳鉴定表明:重组质粒大于蓝斑菌质粒。以bamhⅰ、kpnⅰ双酶切重组质粒可获得比原pcr产物略大的核苷酸片段,并从中以pcr方法扩增出与原pcr产物大小相同的核苷酸片段。