表达犬瘟热病毒核蛋白的重组犬2型腺病毒构建与包装

？为构建表达犬瘟热病毒核蛋白的重组犬2型腺病毒，用mluⅰ和sphⅰ双酶切真核表达载体pvaxlpn，获得cdvn基因表达盒，将cdvn基因表达盒克隆入预先用sspⅰ酶切后的线性化质粒pvaxδe3中，构建含cdvn基因表达盒的转移质粒pvaxδe3lpn。用nruⅰ和salⅰ双酶切转移质粒pvaxδe3lpn，回收e3区部分缺失的含cdvn基因表达盒的目的片段，定向克隆入同样酶切处理含cav-2全基因组的质粒载体ppoly2-cav-2中，构建e3区部分缺失的包含cdvn基因表达盒的重组质粒pcav-2-cdvlpn。重组质粒pcav-2-cdvlpn经ascⅰ酶切获得线性化基因组cav-2-cdvlpn。此基因组与nruⅰ和salⅰ分别酶切cav-2sy基因组获得的片段混合，利用脂质体介导共转染mdck细胞，重复转染3次后，出现典型cav-2病变，经电镜观察和酶切鉴定，证明表达犬瘟热核蛋白的重组犬2型腺病毒包装成功。