犬2型腺病毒e1转化细胞的建立

为建立能表达犬2型腺病毒(cav2)e1基因的辅助细胞,本研究用含cav2e1基因的重组质粒pce1t对dk细胞进行转染,经g418的筛选,得到26个细胞克隆。用cav2e1a特异引物对各细胞克隆进行pcr和rtpcr检测,pcr结果表明转染后的细胞克隆都能扩增出536bp的特异性片段,但仅有6株为rtpcr强阳性,能扩增出652bp的特异带。再对rtpcr强阳性的细胞克隆进行westernblot分析,最终挑选到一个既能转录e1a基因,又能表达e1b19kd蛋白的克隆细胞株(dke1)。