毕赤酵母工程菌表达乙肝表面抗原结合蛋白(sbp)的发酵纯化工艺研究

乙肝表面抗原结合蛋白(hbsagbindingprotein,sbp)是以hbsag为探针,通过人肝cdna噬菌体表达库筛选的一种人源蛋白。sbp可特异性结合乙肝表面抗原(hepatitisbvirussurfaceantigen,hbsag),增强乙肝疫苗的免疫效果,是一种潜在快速高效的免疫佐剂。成功构建了分泌型高表达sbp的毕赤酵母工程菌。对该菌株进行了放大规模发酵表达,并对纯化工艺进行了研究。在发酵实时检测过程中,自诱导剂甲醇加入开始,sbp蛋白的分泌表达量随时间推移而逐渐增加,发现于38h达到最佳水平且此时杂蛋白含量最少,是放罐收集菌液的最佳时间。18l发酵液在低温离心除菌体和沉淀物后可得到15l的上清液,再利用截留量为5kda的超滤膜包将上清液浓缩至2l,将浓缩后的上清液依次通过s200分子筛柱和tdeae阴离子交换柱进行分离纯化,可得到300ml浓度为1.125mg/ml、纯度达98%的目标蛋白液,发酵液得率为22.5mg/l;最后将蛋白液定量分装冻干低温保存。所获得的放大规模sbp发酵诱导表达条件和sbp蛋白的分离纯化工艺,为sbp蛋白大规模生产奠定了坚实的基础。