kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂iskui-1的原核表达、纯化及活性研究

目的:原核表达并制备重组蜱kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂iskui-1,检测其抗凝血及抑制蛋白酶活性。方法:构建pet32a-sumo/iskui-1原核表达质粒,并转入到e.colibl21(de3)中,用iptg诱导表达。表达产物经ni-nta亲和层析,在层析柱上用sumo蛋白酶切割融合伴侣,纯化后得到重组目的多肽riskui-1。用pt及aptt法检测重组目的多肽的抗凝活性,发色底物法检测riskui-1对丝氨酸蛋白酶的抑制活性。结果:用原核表达系统获得了riskui-1,其无延长pt及aptt活性,对人中性粒细胞弹性蛋白酶具有较好的抑制活性(ic50=1.83μm),且特异性强。结论:iskui-1是一种活性较好的人ne抑制剂。因此为进一步探讨riskui-1的生物学功能及其作为新药开发应用奠定了基础。