幽门螺旋杆菌重组尿素酶b亚基的纯化及其免疫学性质的研究

目的:幽门螺旋杆菌(hp)尿素酶是hp重要的定制因子和致病因子,hp尿素酶活性位点位于hp尿素酶b亚基(ureb),研发基于ureb的hp疫苗是一种很有前景的防治hp感染的策略。方法:主要利用基因克隆技术从幽门螺旋杆菌标准菌株ss1(hpss1)获得hp尿素酶b亚基基因,并构建含有重组hp尿素酶b亚基(rureb)基因的重组表达载体pet-rureb及其重组菌株;重组菌株经蛋白表达和优化后,利用ni-ntp镍离子亲和层析和deaesepharoseff阴离子交换层析纯化重组尿素酶b亚基(rureb),并进一步通过腹腔注射免疫balb/c小鼠,研究rureb的免疫学性质。结果:通过基因克隆技术成功获得了hp尿素酶b亚基基因,并成功构建了重组表达载体pet-rureb及其重组菌株bl21(de3)/pet-rureb,经蛋白表达优化及纯化,可获得高纯度(96.5%)的重组蛋白rureb。重组蛋白rureb辅以弗氏佐剂腹腔注射免疫balb/c小鼠,经间接elisa鉴定小鼠能够产生针对天然hp尿素酶和ureb的高滴度特异性抗体,且能够显著性抑制hp尿素酶的活性。结论:重组hp尿素酶b亚基能够在大肠杆菌表达系统中获得较高水平的表达,具有较高的免疫学特异性,其抗体能够有效抑制hp尿素酶活性。为研究基于尿素酶的防治hp感染的hp疫苗奠定了一定的实验基础。