抗人aeg-1单克隆抗体可变区基因克隆及序列分析

aeg-1基因位于人染色体8q22,编码582个氨基酸,参与多种信号转导途径并与多种恶性肿瘤的发生、发展及生物学表型密切相关。为更好地探讨aeg-1生物学功能,以纯化的pgstag-aeg-1蛋白免疫balb/c小鼠,应用细胞融合技术并经筛选及鉴定,获得了分泌抗人aeg-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株1e3;westernblot及免疫组化证实该细胞株分泌的单克隆抗体能与肿瘤细胞中aeg-1蛋白特异性结合;rt-pcr方法从1e3细胞中克隆出抗aeg-1抗体的vh和vl基因片段,通过测序分析、碱基和蛋白序列的比对确认该株抗体为鼠源性igg的轻、重链可变区基因。进一步运用kabatsystem在线分析系统对vh和vl基因进行结构分析,确证fwrs和cdrs的结构完整,vh编码117个氨基酸;vl编码119个氨基酸,属于轻链κv家族。实验结果为进一步研究aeg-1与恶性肿瘤发生、发展的关系及在其临床诊断中的应用奠定了基础。