半胱氨酸蛋白酶ides的原核表达、纯化及活性鉴定

酿脓链球菌来源的免疫球蛋白g降解酶(immunoglubuling-degradingenzymeofstreptococcuspyogenes,ides)是一种典型的半胱氨酸水解酶,可以在抗体铰链区的特定位点进行酶切,使igg水解为完整的f(ab)2片段和fc片段,由于其独特的酶活特异性和高活性,ides可以作为工具酶应用于igg的亚单位制备、结构分析及表征分析.利用双标签(gst-tag及his6-tag)表达系统在e.coli中高效表达了可溶性重组蛋白酶gst-ides-his6,并在ides的氨基端与gst之间加上肠激酶酶切位点,以利于标签的去除.再利用亲和层析的纯化方法对目的蛋白进行纯化.使用sds-page、hplc-sec、lc-ms对纯化后的ides进行分析和鉴定.结果表明:本系统所表达的蛋白酶ides得率高,每1l菌液纯化可获得约25mg纯度为90%以上的蛋白酶ides,将此蛋白酶与抗体igg以1:100(m/m)比例混合,于37℃反应30min,即可酶切完全.能够满足蛋白质结构分析中对蛋白酶的高质量要求,并且适用于抗体类药物的表征分析.同时,蛋白酶ides也可以应用于生物仿制药、生物改良药和新一代抗体以及fc-融合蛋白的研究.