表达全人源抗人ige单抗的细胞株构建及筛选

目的:构建及筛选高效表达原创性全人源抗人ige单克隆抗体的重组工程细胞株.方法:将采用核糖体展示技术筛选到的原创性全人源抗人ige单链抗体(scfv)基因改构设计为igg1κ型全长抗体,构建重组真核表达质粒并电转染cho-s细胞,dot-blot法选取多株高表达克隆进行40ml摇瓶批次培养,再据细胞生长特征及抗体表达量选取高表达克隆进行40ml摇瓶及3l摇瓶流加培养研究,选取候选细胞株并对改构前后抗体的生物学活性进行比较研究.结果:成功构建了pmh3-h、pmh3-l、pcapuro-h、pcapuro-l四种重组真核表达质粒并成功共转染cho-s细胞.完成了4次电转染8轮细胞克隆筛选,获得两株表达量较高的候选克隆mab和mab,在3l摇瓶流加培养中抗体表达量分别达到470mg/l及499mg/l.生物膜光干涉技术(bio-layerinterferometry,bli)亲和力结果显示mab1#及mab2#两株单抗亲和力均达到nmol/l级(10-9),与现有唯一上市的抗人ige单抗药物奥马珠单抗(omalizumab)的亲和力相当.选取mab1#全长抗体与其改构前的母本单链抗体的表面等离子共振技术(surfaceplasmonresonance,spr)中和活性比较结果显示mab1#抑制hige与fcεri结合的ec50为3nmol/l,ec90为9nmol/l,较改造前亲和力提高了4.3倍,中和活性(ec50)提高了23.7倍,中和活性(ec90)提高了41.3倍.结论:成功将表达原创性全人源抗人ige的单链抗体(约25kda)改造为亲和力及中和活性均大幅提升的全长抗体(约150kda),获得2个候选细胞株.