ⅱ型志贺样毒素b亚单位的重组表达及其受体结合活性

目的：在大肠杆菌中重组表达ⅱ型志贺样毒素b亚单位（stx2b），并对其表达形式和受体结合活性进行分析。方法：pcr方法从肠出血性大肠杆菌（ehec）o157:h7中钓取stx2b编码基因，利用基因克隆技术构建重组大肠杆菌pet-stx2b/bl21，iptg诱导目的蛋白高效表达并对表达的包涵体进行变性和复性处理，离子交换层析纯化蛋白。通过sds-page变性和非变形蛋白电泳，分析重组stx2b的表达形式，并利用hela细胞结合模型，评价重组stx2b与细胞受体的结合活性。结果：构建的重组大肠杆菌pet-stx2b/bl21能高效表达stx2b，经变性、复性及离子交换层析操作，获得高纯度的目的蛋白。sds-page变性和非变形蛋白电泳分析显示，重组stx2b以二聚体形式存在，单体之间通过二硫键相连。细胞结合试验显示，重组stx2b与hela细胞具有特异结合活性。结论：成功构建表达stx2b的基因工程菌，stx2b的受体结合活性不依赖于五聚体形式。