人snap25基因重组腺病毒的构建与表达

利用rt-pcr法，从人胰腺组织扩增出snap25基因，定向克隆至pentr-topo载体获得重组质粒pentr/d-topo-snap25。经pcr及测序验证其阅读框正确。再与腺病毒载体pad／cmv／v5一dest发生lr重组反应，snap25取代pad／cmv／v5一desttm中的ccdb-cmr基因，获得重组腺病毒载体pad／cmv／v5一dest-snap25(pad-snap25)。重组腺病毒载体经paci酶切，脂质体法转染hek-293a细胞．以鼠抗人snap25单克隆抗体为一抗，做荧光及westernblot检测，结果表明重组腺病毒pad-snap25在hek-293a细胞中包装成功。重组腺病毒pad-snap25感染大鼠胰岛，结果表明在高糖浓度下，外源性snap25蛋白的表达促进了大鼠胰岛素分泌。