cloningandexpressionofegfrtyrosinekinaseandconstructionofthescreeningmodelfortheenzymaticinhibitors

表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，egfr)属受体酪氨酸激酶(tyrosinekinase，tk)家族，其胞内的酪氨酸激酶在细胞信号转导通路中具有十分重要的作用。许多肿瘤的发生、发展都与egfr胞内酪氨酸激酶的异常表达密切相关。因此，egfr胞内酪氨酸激酶的抑制剂有可能成为治疗肿瘤的有效药物。本研究从人脐静脉内皮细胞(huvec)提取总rna，采用rt-pcr获得egfr酪氨酸激酶催化域的编码基因。将其克隆至载体pet-30a，在e.colibl21(de3)中进行了成功表达，采用ni-nta亲和层析对其进行了纯化。通过对酶的活性的测定，证明重组egfr酪氨酸激酶蛋白具有利用atp催化底物发生磷酸化反应的激酶活性。以该重组激酶为靶位构建了酶抑制剂筛选模型，拟对微生物代谢产物进行筛选。