组胺h3受体激活剂高通量筛选细胞模型的研究

摘要目的建立基于报告基因的组胺h3受体（h3r）激活剂的高通量筛选模型，用此模型对收集到的中草药化合物组分进行筛选，以发现新的组胺h3r激活剂。方法将h3r基因质粒（h3r/pcdna3.1-hygro）与报告基因质粒（3xcre-luc）按3：1的比例共转染入hek293细胞，建立了稳定的h3r配体的报告基因筛选细胞株。激活剂与细胞表面h3r结合后，激活相应的信号通路，调节forskolin刺激后的报告基因的表达，通过测定荧光素酶报告基因表达水平的变化，评估激活剂影响h3受体的生物活性。结果通过对筛选条件，如激活剂孵育时间、forskolin终浓度、化合物溶剂的选择、溶剂dmso终浓度等的优化，建立了可靠的筛选方法，并对多种中草药萃取物进行了筛选，找到了两种对h3r有活性的中药组分。结论建立的细胞模型可以有效的应用于以组胺h3受体为靶点的高通量药物筛选。