gnrh-peⅱ-luffins重组嵌合毒素的制备与细胞毒性检测

目的：制备以ⅰ型促性腺激素释放激素（gnrhⅰ）为导向部分，以绿脓杆菌外毒素的结构域ⅱ（peⅱ）为转膜区，以丝瓜毒素luffins2为毒性部分的重组嵌合毒素gnrh-peⅱ-luffins，体外实验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用。方法：重叠pcr法扩增gnrh-peⅱ-luffins的基因，克隆至表达载体pet32a中，转化大肠杆菌bl21(de3)，挑取阳性克隆诱导表达，产物用ni-nta亲和层析柱纯化。纯化蛋白经重组肠激酶（rek）切割去除trx融合蛋白，xtt法检测重组毒素对hela、a549、hepg-2、sp2/0和鸡胚成纤维细胞（cef）的体外细胞毒作用。结果：成功构建了gnrh-peⅱ-luffins的表达质粒，并在大肠杆菌中获得表达，纯化后的纯度为94％。gnrh-peⅱ-luffins对hela、a549、hepg-2和sp2/0的ic50分别为13.50μg/ml、13.74μg/ml、16.79μg/ml和26.07μg/ml，而对cef无作用。结论：重组嵌合毒素gnrh-peⅱ-luffins对肿瘤细胞有较强的杀伤作用。