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中国生物工程杂志 2008
小鼠tap63γ及两种突变体的原核表达、纯化和dna结合活性Abstract: 采用pcr扩增法得到小鼠tap63γ野生型及两种缺失突变体的cdna,3种cdna与表达载体pgex-2tk重组构建成gst融合表达质粒并转化感受态e.colibl21(de3),经iptg诱导了小鼠tap63γ野生型及两种缺失突变体的可溶性表达.诱导表达的菌液经离心收集菌体、超声破碎及tritonx-100增溶后获得可溶性表达蛋白粗提液.利用glutathionesepharose4fastflow亲合层析纯化出电泳均一的3种gst融合蛋白.凝胶滞留分析证实仅野生型小鼠tap63γ蛋白能特异结合p53靶序列,经序列比对及同源建模分析,表明小鼠tap63γdbd结合区的完整性、关键氨基酸的保守性及三维结构的相似性可能是其dna结合活性所必需的.
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