猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3ab的原核表达及其单克隆抗体的研制

摘要　目的　利用原核表达系统表达猪脑心肌炎病毒(emcv)非结构蛋白3ab，并通过杂交瘤细胞技术制备其单克隆抗体，为相关研究工作奠定基础。方法　利用大肠杆菌系统表达具有良好抗原性的重组3ab蛋白，经包涵体纯化后免疫balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,间接elisa筛选阳性的杂交瘤细胞,并结合免疫荧光(ifa)和weaternblot对抗体的特异性进行鉴定。结果　经间接elisa筛选阳性的杂交瘤细胞,获得1株能稳定分泌抗3ab蛋白抗体的杂交瘤细胞株，将其命名为2d12，其亚类测定为igg1/κ。westernblot和间接免疫荧光试验证明该单抗能特异性识别3ab蛋白。结论　成功获得了针对emcv-3ab的特异性单抗,为进一步研究猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3ab的结构与功能及临床诊断试剂的研发奠定必要的物质基础。