从大容量噬菌体抗体库中筛选抗dna-pkcs单链抗体

目的：从单链大容量噬菌体抗体库中筛选特异性的抗dna-pkcs的人源抗体，用于肿瘤治疗或诊断目的。方法：经抗原性分析及blast比对，选定人dna-pkcs蛋白中抗原性高且与其他蛋白没有同源性的片段，进行原核表达及纯化后将其固定在抗原管上，通过4轮“吸附－洗脱－扩增”过程从大容量抗体库中筛选特异性抗体，转化hb2151菌，制备抗dna-pkcs的可溶性单链抗体；elisa检测抗原-抗体结合活性。结果：经生物信息学分析，确定抗原性高且与其他蛋白没有同源性的dna-pkcs片段dpk3（250个aa）、dpk4（257个aa）。经过4轮筛选，获得26个特异性结合dpk3及31个特异结合dpk4的克隆，指纹分析分别有5种和21种不同的可变区片段；成功制备了可溶性抗体。并做了抗原结合活性鉴定。结论：利用单链大容量抗体库获得抗dna-pkcs的噬菌体抗体基因并且成功制备成可溶性抗体，为今后的研究和应用奠定了基础。