紫杉烷13α-羟基化酶基因的克隆及其转化烟草的研究

本研究利用东北红豆杉(taxuscuspidata)cdna文库作为模版，通过pcr技术扩增得到我国东北红豆杉紫杉烷13α-羟基化酶(taxane13α-hydroxylase，简称13oh)的全长cdna，将pcr产物克隆到pgm-t载体后测序结果表明该序列长度为1458bp。同源性比较分析结果表明：其碱基序列与已经报道的东北红豆杉(taxuscuspidata)的13oh基因的一致性为99.38%，其氨基酸序列同与已经报道的东北红豆杉的13oh氨基酸序列的一致性为99.18%。将获得的cdna全长序列正向插入到含有gus报告基因的pcambia1305.1后成功地构建出东北红豆杉13oh植物表达载体pc13oh，通过电击法把pc13oh转入根癌农杆菌gv3101中。利用该工程菌株对普通烟草进行了转化，在潮霉素选择压力下获得了完整的再生植株。利用13oh基因特异引物，通过pcr技术筛选到4株阳性再生植株。在这4株再生植株中，有3株植株gus报告基因的组织化学染色呈现阳性反应，表明该植物载体表达载体中与13oh相融合的gus基因成功地得到了表达。本研究为今后深入研究13oh基因在烟草中的表达和开展紫杉烷13α-羟基化酶基因对红豆杉细胞的转化以及研究作用于该基因的小rna调节子打下了基础。