三株沙门氏菌的鞭毛基因重组及蛋白的免疫特性

三株强致病性的甲型副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌ⅰ相鞭毛抗原分别为h-1a、h-1i、h-1c。设计三对引物，利用pcr扩增出具有决定抗原表位特异性的基因片段，长度分别为1088bp、633bp、1056bp。利用引物上的linker和重叠延伸pcr扩增技术将此三段抗原决定区基因序列串联，获得重组鞭毛基因，共长2747bp。构建鞭毛重组基因（f-a-i-c）的原核表达载体pet-28a-f，将重组质粒转化大肠杆菌bl21株，经iptg诱导表达蛋白，sds-page电泳分析后得到目的蛋白大小约为95ku，并优化表达条件。在37℃下终浓度为1mmol/l的iptg诱导6h后，经薄层扫描分析得到目的蛋白表达量约为11.2%。超声破碎细胞后，纯化含有目的蛋白的包涵体，对八周龄雌性豚鼠做足垫免疫组，间接elisa检测抗体效价为1：512000,敏感性为8μg/ml，这为后期抗体检测研究奠定了基础。