长心卡帕藻issr-pcr反应体系的正交优化研究

采用ctab法提取了大型经济海藻长心卡帕藻（kappaphycusalvarezii）的基因组dna。通过单因子梯度试验，确定了影响简单重复序列间区（issr）扩增结果的模板、mg2+、dntps、引物、taqdna聚合酶的适宜浓度、退火温度和反应的最佳循环次数；利用正交试验优化了模板、mg2+、dntps、引物、taqdna聚合酶的配比浓度。结果表明：在进行长心卡帕藻的issr扩增时，在总体积为20?l的反应体系中，模板、mg2+、dntps、引物、taqdna聚合酶的最佳浓度分别为15ng、2.7mmol/l、0.2mmol/l、0.1mmol/l、1.5u；退火温度为48℃。反应程序为94℃预变性5min，然后经94℃变性50s、48℃退火1min，72℃延伸2min，进行32次循环，最后在72℃再延伸8min。本实验结果为卡帕藻属和麒麟菜属类海藻的遗传多样性、种质鉴定、分子标记及辅助育种等研究提供了有用的手段。