人转铁蛋白重组载体的构建及其表达调控的研究

转铁蛋白（tf）是一种具有重要生理功能的糖蛋白，对它的开发利用具有重要的经济和社会效益。为探讨高效表达人转铁蛋白（htf）的可行性及可能的调控机理,本文克隆得到了兔转铁蛋白启动子（rppromoter），并构建了以pcdna3.1(-)为骨架的由rp启动htf表达的重组载体，转染大鼠肝脏细胞株brl-3a和小鼠乳腺上皮细胞株hc-11细胞分析了htf表达情况，并进一步筛选得到了两个稳定表达htf的细胞克隆。在细胞培养液中加入不同剂量的5-杂氮胞苷（5-aza-dc）,分析甲基化修饰对基因表达的影响。结果显示,兔转铁蛋白启动子能成功启动htf的表达；而且5-aza-dc能进一步提高了htf表达水平，且提高的程度和5-aza-dc的剂量成正相关，但是不同克隆htf表达升高程度不一样。结果说明htf的表达受到甲基化修饰影响。