拆分获得(r)-酮基布洛芬酯酶基因的筛选、克隆与表达

以自筛选出的具有一定不对称拆分外消旋酮基布洛芬氯乙酯能力的野生菌bacillusmegateriumnk13为材料，通过构建其基因文库，筛选得到一个阳性克隆重组子puc18-nk-hyd3。分析测序结果发现外源片段中包含一段完整的741bp的开放阅读框，其编码的蛋白中含有酯酶的gxsxg保守序列。经在ncbi的blast系统中比对，证明该酯酶基因属于首次发现（genbankaccessionnumber:gu143552）。将酯酶基因克隆到载体pet21b(+)中，转化e.colibl21(de3)，经iptg诱导后在宿主菌得到表达。sds-page电泳检测证明该酯酶蛋白分子量约为28kda。tlc和hplc检测结果显示，该酯酶优先水解(r)-型底物，在重组菌菌液体系，转化率为15%时，酯酶拆分获得(r)-酮基布洛芬的过量值（e.e.%）最高，达62.74％；改用重组菌湿菌体的pbs体系后，在转化率为10%-50%时，酯酶拆分获得(r)-酮基布洛芬的过量值（e.e.%）一直保持在73%-76%之间。