amirna分子设计及其离体合成策略

详细介绍了基于wmd3(webmicrornadesigner3)软件平台的amirna(artificialmicrorna)分子自动设计方法及其离体合成策略。应用网络在线设计时，只需输入目的基因靶序列相关信息后便可获得候选amirna。根据选定的最佳amirna，可得到四条含有amirna以及载体中mirna两侧序列的寡聚核苷酸序列。重叠延伸pcr合成策略可以以这四条序列以及根据质粒模板设计的a、b两段序列作为引物，扩增出目标amirna。同样尿嘧啶切除的策略也可合成amirna，但这些引物序列需做适当调整变动。此外，本文还介绍了基于特异引物退火的amirna合成策略，该策略可保证amirna分子能够一步pcr合成，合成后的amirna表达盒可通过合适的限制性位点被克隆至目的载体中的相应位点。可以预见，这种amirna分子设计的科学性与合成策略的精确性将会使amirnai技术在生物基因功能分析中发挥更加重要的作用，对生命科学研究产生深远的影响。