一株拮抗香蕉枯萎病的内生细菌的分离及其几丁质酶基因信号肽的分泌活性分析

目的：旨在分离并选择一株香蕉内生细菌作为内生基因工程生防菌，并克隆其几丁质酶基因的信号肽序列。方法：从香蕉植株杆下部分离并选择了一株拮抗香蕉枯萎病且具有分泌几丁质酶能力的内生细菌，对该菌株进行了形态观察、生理生化测定和16srdna序列分析，克隆了其几丁质酶基因的编码序列并预测了其信号肽，构建了含有信号肽和不含信号肽的几丁质酶的表达菌株bl-chi1和bl-chi2。结果：结合形态观察、生理生化特征和16srdna序列比对分析确定该菌株为klebsiella属，将该菌株命名为kkwb5；bl-chi1和bl-chi2经iptg诱导后，均表达了与预期蛋白大小一致的蛋白，同时bl-chi1诱导后的培养基上清中出现一条约45kda的条带，而bl-chi2和空载体的bl-pet22b诱导后的培养基上清中均无此条带；几丁质水解试验发现，bl-chi1诱导后的培养基上清中的蛋白经浓缩和纯化后都能在几丁质平板上形成透明水解圈。结论：该几丁质酶的信号肽能被bl21（de3）所识别，将几丁质酶分泌到培养基中，并且分泌的几丁质酶具有水解几丁质的生物学活性。内生菌kkwb-5的分离及其几丁质酶分泌信号肽序列的克隆为进一步构建内生工程菌来防治香蕉枯萎病打下了基础。