表达h5n1亚型禽流感病毒ha基因重组腺病毒的遗传稳定性分析及滴度测定

研究表达h5n1亚型禽流感病毒ha基因重组腺病毒pad-h5的遗传稳定性及重组病毒的滴度测定。将重组腺病毒pad-h5在293细胞上连续传代20次，取第5、10、15和20代的重组病毒采用pcr方法扩增禽流感病毒ha基因，并进行基因序列测定分析；用标记为gfp的快速测定法计算出20代次时重组病毒的滴度。从各代重组病毒dna中均扩增出了约1700bp的目的条带，与ha基因片段长度一致，基因序列分析表明：第5、10、15代重组病毒中的ha基因序列与原始转移载体序列完全一致，第20代重组病毒插入基因有1处发生了点突变(即ha基因417位a→g)，但其编码的氨基酸未发生变化(即同义突变)，表明表达的目的蛋白抗原表位未发生变化；计算出的重组病毒滴度为108.875pfu/0.1ml。重组腺病毒pad-h5在293细胞上连续传代20次，具有良好的遗传稳定性，重组腺病毒的病毒滴度相对较高。