乙酰氨基半乳糖转移酶14多抗的制备及鉴定

利用生物信息学方法分析乙酰氨基半乳糖转移酶14(galnt14)蛋白序列,根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择一段多肽序列作为抗原用于抗体制备。将该dna片段插入pet-dsba,构建原核表达载体pet-dsba-galnt14。用iptg诱导表达蛋白,经镍柱纯化蛋白后免疫新西兰大白兔,获得galnt14多克隆抗血清。用免疫扩散和免疫印迹检测抗体效价及特异性。结果显示,成功表达并纯化了目的蛋白。免疫动物后获得了效价较高、特异性强的galnt14多克隆抗体,galnt14蛋白在人乳腺癌和肾癌细胞株中均有表达。该结果为进一步研究galnt14的功能及其在肿瘤发生发展的作用方面奠定了基础。