8种天然药物与硼替佐米对hbsag抑制作用及蛋白质组学分析

目的:比较硼替佐米和几种天然药物体外对hbv的抑制作用,并探索硼替佐米抑制hbv的分子机制。方法:采用mtt法观察不同浓度药物对hbv-tg小鼠原代肝细胞的毒性,确定最大无毒浓度,用elisa方法检测培养24h后细胞上清中hbsag的变化,比较不同药物对hbsag的抑制率。经1μmol/l硼替佐米处理原代肝细胞24h后,提取蛋白质,采用双向凝胶电泳分离总蛋白,得到差异表达的蛋白质点进行分析比对。以rt-pcr及westblot验证选定的差异蛋白,分析其与hbv抑制作用的关系。结果:在8种天然药物中以扁蒴藤素对hbv作用最强,ic50为0.43μmol/l,egcg的ic50是24.9μmol/l,且安全性较好。硼替佐米作用原代肝细胞蛋白质组分析发现了21个差异斑点,其中包括hsp60异构体(gi/26353954)。rt-pcr检测发现经硼替佐米作用后hsp60、hsp90表达下调,hsp70表达上调,而westblot鉴定hsp60变化不大。但是经egcg作用后hsp90表达的下调与对hbsag的抑制是一致的。结论:调节宿主细胞的蛋白质降解与折叠将有利于寻找新型抗hbv药物。