fas基因mrna反义靶点筛选和体外验证

应用parass(poly-aanchoredrnaaccessiblesitesscreening)技术筛选fas基因mrna获得3个潜在反义作用靶点，靶点1、2、3分别位于fas基因297nt-317nt、619nt-639nt和662nt-682nt。设计了对应靶点的反义寡核苷酸a1、a2、a3，和10-23型dnazymed1、d2和d3。将反义寡核苷酸和fas基因rna结合再加入rnaseh进行反应，10-23型dnazyme则直接与fas基因rna作用，结果表明：3个靶点的反义寡核苷酸组及dnazyme均能降解fas基因rna，为有效靶点，其靶点反应优势次序为靶点3>靶点1>靶点2；而非靶点对照组和有效靶点突变了2个碱基的对照组均没有反应。靶点2和靶点3与isis公司经过多次实验筛选到的fas反义作用靶点位置基本相同，表明parass技术的有效性和可靠性。获得的有效反义寡核苷酸和dnazyme为后续研究打下基础。