联合调控对中国红豆杉细胞关键酶基因表达的影响

红豆杉悬浮培养细胞可以持续提供抗癌药物紫杉醇及一些紫杉烷类。在中国红豆杉悬浮培养细胞中，云南紫杉烷c（tc）是主要的紫杉烷。为了更理性地调控紫杉醇或有用紫杉烷的生产，有必要深入了解其生物合成过程。采用实时定量pcr（real-timequantitativepcr，即rq-pcr）技术考察经调控后紫杉醇及紫杉烷代谢中关键酶基因—tasy，t5αh，tdat，t10βh，tαh，t14βh表达水平的变化。在细胞培养的第7天和12天，分别以100μm2,3-二羟丙基茉莉酸（dhpja）诱导，同时在细胞培养第7天进行20g/l蔗糖饲喂、100g/lxad-7hp的原位吸附。该联合调控处理使得细胞培养第30天时，tc产量高达1517±37mg/l，是对照处理的11.1倍，是dhpja重复诱导联合蔗糖饲喂处理的1.7倍。rq-pcr结果显示：dhpja的加入可使6个基因表达水平显著提高，但在12小时后快速下降，需补充dhpja以再次提高基因表达水平。吸附剂同时引入会延缓基因表达水平的提高速度，但却能维持基因表达处于一个较高的水平，表现为在细胞培养中后期，基因表达水平将显著高于无吸附剂的调控体系。与13α-羟化相对应的tαh基因有所不同，吸附剂的存在更显著地抑制其表达，但仍有维持表达的功能。