急性早幼粒白血病hl60细胞电转染条件的优化

目的：比较不同电转染条件下，真核表达载体转染hl60细胞的效率，筛选得到针对hl60细胞最佳的电转染条件。方法：采用pdsred-c1真核表达载体，分别在2mm和4mm电转杯中依照不同电转条件对hl60细胞进行转染，根据存活细胞所占比例确定电转参数；在转染48h后，比较不同质粒加入量及二甲基亚砜（dimethylsulfoxide,dmso）加入电转体系前后的细胞转染阳性率。调整g418筛选浓度，在选定转染条件下进行hl60细胞电转，采用流式细胞技术，细胞化学染色及超微结构观察，分析电转前后hl60细胞的生物学性状。应用相同条件再转染eyfp-c1质粒于hl60细胞，g418筛选后观察荧光表达情况。结果：hl60细胞在2mm和4mm电转杯中的死亡数量随电击强度和脉冲次数的增加而升高，且方形波较回旋波有更强的击穿细胞膜的能力；固定电转参数下，2mm和4mm电转杯中的hl60细胞电转阳性细胞数随加入质粒量的增加呈先升高后下降的趋势，且在相同质粒加入量，2mm电转杯比4mm电转杯有更高的转染效率；在相同电转参数和相同电转杯中，预冷条件下加入dmso电转时阳性率比不加入dmso进行电转的阳性率高近13倍；400μg/mlg418是最佳筛选浓度；选定最佳电转条件进行电转，通过筛选，没有发现细胞表面分化抗原cd11b和cd14的表达，细胞形态原始，未见凋亡现象发生。相同条件电转eyfp-c1空载质粒于hl60细胞仍然可以获得很好的转染效果。结论：hl60细胞电转染条件的改良，可以有效提高hl60细胞的电转阳性率，为后续细胞真核表达载体的转染及基因功能研究奠定基础。