real-timepcr方法测定转基因小麦中外源基因拷贝数

采用sybrgreenⅰreal-timepcr方法检测7株转基因小麦中外源半夏凝集素基因的拷贝数。以小麦蜡质基因（wx012）作为内参基因，以未转基因小麦基因组dna为内参基因标准品进行5倍梯度稀释得到内参基因ct值与起始模板量的相关性标准曲线：y=-0.2667x+6.98；以含半夏凝集素基因（pta）的质粒dna为目的基的因标准品同样进行5倍梯度稀释，建立目的基因ct值与起始模板量的相关性标准曲线：y=-0.2118x+4.53。通过sybrgreenⅰreal-timepcr分别获得每一样本中目的基因和内参基因的ct值，将ct值分别代入标准曲线计算该样本中内参基因和目的基因起始模板量，目的基因与内参基因起始模板量比值即是目的基因在该转基因植株中的拷贝数。计算结果为：单拷贝的有1株，2个拷贝1株，3拷贝和4拷贝的各有2株，其中有1株为假阳性植株。