abca1胞外第四环缺失突变体的构建及其抗砷性初步研究

目的：构建abca1细胞外第四环第1479～1597位氨基酸残基缺失的突变体。方法：采用重叠区扩增基因拼接法构建abca1第1479～1597位氨基酸残基缺失的突变体基因，并将其克隆至pcdna3.1/v5-his/abca1重组载体上，脂质体法转染hela细胞，激光共聚焦观察突变体定位，cellcountingkit-8(cck-8)试剂盒检测其48h急性砷中毒后生存率的变化。结果：该突变体基因经dna序列分析表明其具有正确的序列和阅读框。激光共聚焦证实其表达的蛋白仍然能正确定位在hela细胞的细胞膜上。cck-8结果显示转染重组质粒和突变体质粒的细胞在各种砷浓度下生存率都较空载体组高。结论：成功构建了abca1胞外第四环第1479～1597位氨基酸残基缺失的突变体，且其表达的蛋白仍然定位于细胞膜上，突变体仍然具有一定的抗砷性，提示abca1胞外第四环可能不是关键抗砷结构域。