一种基于温敏质粒的新型基因敲除方法

基于温敏型质粒而不用线性dna的方法用于快速敲除沙门氏菌染色体上的目的基因。以伤寒沙门氏菌s.ty2基因组为模板扩增得到的ssav基因的上下游同源臂，与两端带有frt位点的卡那霉素抗性基因片段连接到温敏型质粒phy304，共同构建同源重组载体；然后转化s.ty2，通过筛选得到带有抗性标记的重组菌。通过转入重组酶表达质粒pcp20，去除抗性标记，得到ssav基因缺失的重组菌，并在dna水平进行了鉴定。建立了一种改进的基于温敏质粒的沙门氏菌的基因敲除方法，此方法也值得在其他革兰氏阴性菌的基因敲除中尝试应用。