s-腺苷甲硫氨酸合成酶的组成型表达、产物纯化及鉴定

将大肠杆菌(e.colik12)s腺苷甲硫氨酸合成酶(sams)基因克隆至质粒pbr322中,获得的重组质粒pbr322-sams转入大肠杆菌jm109菌株，构建了能高效组成型表达sams的重组菌e.colijm109(pbr322-sams)。将重组大肠杆菌破碎后上清液经20%~40%硫酸铵分级盐析、phenyl-sepharosefastflow疏水层析和qsepharosefastflow离子交换层析,即可得到纯度提高5倍，比活为48.7μ/mg的sams，三步纯化的总回收率为62%，纯度达到92%。sams表达量为1176μ/l，占到菌体可溶性总蛋白的20%。重组酶的最适反应ph为8.5，4℃下在ph7.5的缓冲液中保温10h酶活性几乎不改变。重组酶反应的最适温度为55℃，酶活性稳定的温度范围为20~35℃。重组酶的kmlmet为0.22mmol/l，vmaxl-met为1.07mmol/(l·h)，kmatp为0.52mmol/l，vmaxatp为1.05mmol/(l·h)。