富集宏基因组dna中α淀粉酶全长基因的克隆及重组表达

利用反向-巢式pcr（in-pcr）从富集土壤宏基因组dna中克隆到一种α-淀粉酶基因的全序列，其基因登录号为gu045523，测序分析显示与来自bacillussp.kr-8104耐酸淀粉酶不完整基因同源性为99%。将获得的α-淀粉酶成熟肽基因与表达载体pse380连接，导入escherichiacolijm109中，iptg诱导表达。粗酶液经ni-nta、sephacryls-200纯化后测定酶学性质：重组酶gxaa的最适作用ph为7.0，最适作用温度为75℃，对可溶性淀粉的km值为11.6g/l。构建突变子e27g、a450t、e27g-a450t，其酶学性质与原始酶没有显著差别。