嵌合内含子对抗bfgf抗体基因在293t细胞中表达的影响

目的：构建含嵌合内含子和抗bfgf抗体基因的真核表达载体并在293t细胞中表达，探讨嵌合内含子对抗体表达的影响。方法：设计引物分别从载体pcl-neo和pcomb3-fab25中扩增出内含子和抗体fd段、κ链基因序列，按不同组合构建到含人免疫球蛋白igg1恒定区fc段基因的表达载体pigg中。重组质粒经脂质体pei转染293t细胞，荧光显微镜观察质粒转染情况，采用夹心elisa和westernblot检测细胞上清中抗体的表达。结果：dna测序和酶切分析表明，内含子和抗体基因成功插入pigg，获得了重组质粒pigg-fd-κ、pigg-fd-intron-κ、pigg-fd-κ-intron和pigg-fd-intron-κ-intron。倒置荧光显微镜下可观察egfp大量表达，westernblot分析上清中有抗体的表达，夹心elisa检测pigg-fd-κ、pigg-fd-intron-κ、pigg-fd-κ-intron和pigg-fd-intron-κ-intron抗体表达量分别为1.21mg/l、0.468mg/l、7.39mg/l、0.601mg/l。结论：成功构建了含嵌合内含子和抗体基因的真核表达载体并在293t细胞中得到表达。嵌合内含子插入κ链基因5’端可提高抗体的表达，插入fd段5’端则抑制抗体的表达。