犬传染性肝炎病毒hexon蛋白loop1、loop2基因的克隆与表达

犬传染性肝炎病毒（ichv）主要的中和抗原表位位于六邻体蛋白loop1、loop2上。本次研究参考genebank发表的基因序列设计引物，提取ichv基因组dna，，分别pcr扩增六邻体蛋白（hexon）的loop1、loop2基因片段，用t4酶连接在一起，克隆入原核表达载体pet28a中，测序显示本室保存病毒分离株loop1与cll株、ri261株和torontoa26/61株核苷酸序列同源性分别为100%、100%和83.8%；loop2与cll株、ri261株和torontoa26/61株核苷酸序列同源性分别为88.1%、88.1%和99.3%，推导的氨基酸序列同源性分别为93.6%、93.6%和98.6%。转化bl21工程菌，实现了重组loop蛋白在大肠杆菌中的高效表达，其表达的重组蛋白以包涵体形式存在，分子量约为36kda，并且利用镍柱纯化重组蛋白，纯度达95%以上。本实验为建立新的犬传染性肝炎病毒基因工程产品奠定了良好的基础。