柞蚕核型多角体病毒基因表达载体系统的构建与基因表达

柞蚕是一种野外饲养的经济昆虫，主要分布在我国东北部山区。柞蚕以蛹滞育越冬，其蚕蛹个大、容易固定、保存时间长、无须饲养、容易运输等优点。利用柞蚕蛹作为生物反应器生产外来蛋白质，可以大规模机械化生产，减少操作上的烦琐和劳动力。本文利用柞蚕核型多角体病毒(anpenpv)作为基因表达载体，在柞蚕培养细胞(anpe细胞)和柞蚕蛹中成功地表达了β-半乳糖苷酶基因（lacz），并利用anpe细胞筛选、纯化获得了anpelacz重组病毒。该重组病毒的β-半乳糖苷酶产量，在tc-100(含10%fbs)培养的anpe细胞中最高酶活性为感染后第12天的40.9units/ml，在sf-900ⅱ培养的anpe细胞中最高酶活性为感染后第18天的59.9units/ml，后者表达量稍高，但时间滞后。anpelacz在5℃保存了7个月的柞蚕蛹中，感染后第15天酶活性达到最高，雌蛹14.3units/g，雄蛹11.7units/g，雌蛹比雄蛹略高。结果显示，柞蚕核型多角体病毒和柞蚕蛹可以作为一个可以机械化大规模生产的新型杆状病毒基因表达载体系统开发和利用。