三重表达肺结核dna疫苗在细胞水平的检测

目的检测共表达sirna、抗原基因与hil-12的新型肺结核dna疫苗在人胚肾293细胞中表达。方法在已构建含有靶向抗调亡基因mcl-1l的sirna、结核分枝杆菌抗原基因ag85b-esat6(pvae)、hil-12的新型肺结核dna疫苗pvax-sirna-pvae-il-12基础之上，将抗原基因与增强型绿色荧光蛋白（egfp）基因融合，得到真核表达重组质粒pvax1-sirna-pvae-egfp-hil12。并将sirna单元用靶向egfp基因的siegfp代替，得到pvax1-siegfp-pvae-egfp-hil12重组表达载体。用重组质粒转染人胚肾细胞293，分别观察融合抗原基因与siegfp的表达。以elisa测定培养细胞上清中hil-12的表达。结果经酶切鉴定和测序证实肺结核dna疫苗改造成功。转染细胞中检测到绿色荧光，证实抗原表达。对照组检测到siegfp的表达。转染48h后检测出细胞上清中hil-12的量为1571.63pg/ml；72h后检测出细胞上清中hil-12的量为2392.25pg/ml。结论已构建的肺结核质粒dna疫苗能在真核细胞中有效表达sirna、抗原基因与hil-12。为进一步研究该dna疫苗抗肺结核的免疫治疗和基因治疗效果打下基础。