幽门螺杆菌napa基因在乳酸菌中的表达及免疫原性分析

为在乳酸菌中表达幽门螺杆菌（helicobacterpylori,h.pylori）中性粒细胞激活蛋白(nap)，口服免疫小鼠后检测其免疫原性。在实验中利用了分子克隆技术构建携带nap基因的重组原核表达质粒pnice:secnap,将重组质粒转化乳酸菌nz9000株，筛选鉴定阳性菌落，诱导表达的nap蛋白用sdspage和westernblot进行鉴定。将雌性icr（cv级）小鼠随机分为4组，分别用pbs、携带空质粒的乳酸菌、携带pnice:secnap的乳酸菌、灭活的h.pylori灌胃。免疫7次后检测其特异性igg和iga的产生。成功扩增了nap基因并构建了重组原核表达质粒pnice:secnap，转化乳酸菌nz9000后经nisin诱导可表达mr约17kda的重组蛋白，表达量约占菌体总蛋白量的9.5%，表达的蛋白能与兔抗h.pylori血清特异性反应,具有良好的免疫原性。携带pnice:secnap质粒的乳酸菌刺激产生的igg水平明显高于携带空质粒组，与灭活h.pylori组没有明显的差异，但其刺激产生的iga水平明显高于其他组。以上结果说明表达nap蛋白的乳酸菌口服免疫小鼠后，能够刺激小鼠产生特异的igg和iga，对幽门螺杆菌疫苗的研究开发具有理论意义。为乳酸菌作为抗原递送载体的研究和h.pylori口服疫苗的开发提供了一定的实验基础。